크로마토그래피 원리 3 (순상, 역상, HILIC 등)

오늘도 크로마토그래피의 타입에 대해 공부한 내용을 적어볼게요

 

1편

2024.08.09 - [인생은 공부] - LC 크로마토그래피 원리 (컬럼분리)

LC 크로마토그래피 원리 (컬럼분리)

2편

2024.08.22 - [인생은 공부] - LC 크로마토그래피 원리 2

LC 크로마토그래피 원리 2

 

 

크로마토그래피의 타입은 5가지가 있어요

1. NORMAL PHASE (순상)
2. HILIC (힐릭)
3. REVERSE PHASE (역상)
4. ION EXCHANGE (이온교환)
5. SIZE EXCLUSION (크기배제)

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여기에 각각 적용되는 원리로 분리와 머무름 메커니즘이 있어요
 
분리 메커니즘은 3가지는
1. 이온 상호작용
2. 쌍극자 상호작용
  1) 영구 쌍극자 (수소결합) 

• 분자가 항상 일정한 쌍극자를 가진 경우, 분자 구조 자체가 전하를 비대칭적으로 분포 시킴

  2) 순간 쌍극자 (비극성 분자) 

• 분자 내에서 순간적으로 전자의 위치가 불균형하게 분포하면서 일시적으로 형성되는 경우

  3) 유발 쌍극자 (반데르발스힘)

• 쌍극자가 없거나 약한 쌍극자만 갖고 있는 분자가 다른 분자에 의해 쌍극자가 유도되어 생긴 경우 

3. 소수성 상호작용
 
이렇게 있고 머무름 메커니즘의 경우
1. 흡착

• 시료 성분이 고정상에 흡착되는 성질로 분리, 고정상이 고체이고 표면에 시료 성분이 흡착되었다가 이동상에 의해 씻겨 나가는 과정에서 분리됨

2. 분배

• 시료 성분이 고정상과 이동상 사이에서 분배되는 성질을 이용해 분리, 고정상이 액체로 코팅된 경우 시료 성분이 이동상과 고정상 사이에서 반복적으로 분배되면서 분리됨

3. 이온교환
4. 크기배제
이렇게 4가지가 있어요

이 원리들을 알고 크로마토그래피 타입을 한번 볼게요

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1. NORMAL PHASE

원리	분석물	고정상	이동상	용출 순서
흡착	극성	극성	비극성	극성이 높으면 늦게
		-Silica - NH, -CH 등	Hexnane Isooctane 등	극성이 낮으면 빨리

 

2. HILIC (역상 이동상에 순상 컬럼 사용)

역상 컬럼 사용시 머무름이 없어 분리가 되지 않는 물질에 사용
극성(친수성)물질
역상 장비에서 사용하는 순상타입이라고 보면 편해요

원리	분석물	고정상	이동상
흡착, 분배	극성 (친수성)	극성	극성
		- HILIC Silica - Cyano - Amide 등	- Water - MeOH - Acetonitrile 등

<그림은 예시일 뿐 저런식으로 뒤집어 나오는 것은 아니예요>

이런식으로  2분대에 용출되어 머무름이 없는 극성 물질(친수성)의 경우 HILIC 컬럼을 사용하면 머무름이 증가하는 것(노랑)을 볼 수 있어요
반대로 비극성의 소수성 물질(초록)은 머무름이 약해져 앞으로 당겨지는 것을 볼 수 있어요

3. REVERSE PHASE

원리	분석물	고정상	이동상	용출 순서
분배	비극성	비극성	극성	극성이 높으면 빨리
		- C18, C8 - Phenyl 등	- Water - MeOH - Acetonitrile 등	극성이 낮으면 늦게

시간이 늦어서 여기까지만 적고 다음번에 이 뒷 내용을 더 적어볼게요 기다려주세요!